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关于基因组RNA纯化试剂盒,你应该知道的事

浏览次数:64发布日期:2021-06-25
   基因组RNA纯化试剂盒用于各种植物、动物和微生物的RNA提取。每个工具箱都有说明书。实验者只需遵循说明书中的步骤。它非常方便,适用于RNA的快速提取。提取的RNA完整性好,纯度高,可用于分子生物学后实验。
  该试剂盒可用于从同一细胞或组织样品中同时纯化基因组DNA和总RNA。由于不需要将样品分成两部分进行不同的纯化步骤,该试剂盒可以在很大程度上回收DNA和RNA。纯化后的DNA和RNA分别洗脱,可立即用于各种下游实验。该试剂盒不含苯酚、氯仿等有毒物质,不需要乙醇沉淀。操作简单快捷。
  基因组RNA纯化试剂盒的操作步骤是什么呢?
  1. 样品处理
  a、植物组织:在-70℃下取新鲜或冷冻组织100毫克℃然后在液氮中研磨,然后将粉末加入1ml裂解液中搅拌均匀。
  b、动物组织:100毫克新鲜或冷冻-70℃加入1ml裂解液,用组织研磨杵或均质器均质。
  c、贴壁细胞:直接将裂解液加入培养板中裂解细胞,每106个细胞加入1ml裂解液。用取样器吹匀。
  d、细胞悬液:离心收集细胞。向106个动物、植物和酵母细胞或107个细菌细胞中加入1mL裂解液,混匀。
  e、血液处理:取新鲜血液0.2-1ml,红细胞裂解液3倍体积,混匀,室温放置10分钟,10000rpm离心1分钟。弃去上清液,如果沉淀中含有红细胞,加入2倍体积的红细胞裂解液重复裂解步骤。离心后,沉淀并添加1ml裂解液混合。
  2、将处理后的样品在室温下放置5分钟,使核酸-蛋白质复合物完全分离。
  3、向匀浆样品中加入0.2ml三录甲烷,盖上试管,剧烈振动15秒,室温放置3-5分钟。
  4、2-8℃离心℃12000rpm,持续10分钟。RNA主要在上层无色水相中,将水相转移到新管中,不吸收沉淀。
  5、吸附柱预处理:向吸附柱中加入500ul洗柱液,室温放置2分钟,离心转速2-812000rpm℃放置2分钟,并丢弃废液。
  6、向第4步收集的上清液中加入200ul无水乙醇,混匀,加入吸附柱中,静置2分钟,2-8转/分离心℃放置2分钟,并丢弃废液。
  7、向吸附柱中加入600ul的漂洗液(使用前请检查是否加入无水乙醇),离心转速2-812000rpm℃放置2min,并丢弃废液。
  8、向吸附柱中加入600ul冲洗液,以2-812000rpm离心℃放置2min,并丢弃废液。
  9、以12000rpm离心2min,丢弃收集管,将吸附柱置于室温下几分钟,从吸附柱中除去残留的冲洗液。
  10、将吸附柱放入新管中,将50-100ul无核糖核酸酶ddH2O滴入膜中芯,室温放置5min,12000rpm离心2min
  即得到RNA。
  好了,以上便是关于基因组RNA纯化试剂盒的相关内容介绍了。
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